3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)測(cè)試盒分析檢測(cè)

產(chǎn)品說(shuō)明： GAPDH（EC1.2.1.12）催化 3-磷酸甘油醛氧化生成 1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途徑的關(guān)鍵酶，與糖異生途 徑、體內(nèi)血糖濃度的維持和糖尿病的發(fā)生密切相關(guān)，在機(jī)體糖、脂、蛋白代謝紊亂疾病中發(fā)揮重要作用。

3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和 ATP 生成 1,3-二磷酸甘油酸。GAPDH 逆向催化 1,3-二磷酸甘油酸和 NADH 生成 3-磷酸甘油醛、無(wú)機(jī)磷和 NAD+，340nm 處測(cè)定 NADH 的減少量可反映 GAPDH 活性的高低。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品： 紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、1mL 石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)） 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液） 進(jìn)行冰浴勻漿，然后 8000g，4℃，離心 20min，取上清，置冰上待測(cè)。 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10 4個(gè)）：提取液體 積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功 率 20%或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 血清（漿）：直接檢測(cè)。